食品微生物檢驗細菌的革蘭氏染色實訓

1. 實驗器材

普通光學顯微鏡、載玻片、接種環、吸水紙、鑷子、酒精燈等。

2. 實驗試劑

蒸餾水、生理鹽水、草酸銨結晶紫溶液、革蘭氏碘液、95%乙醇、沙黃染液。

3. 實驗材料

枯草芽孢桿菌斜面、金黃色葡萄球菌斜面、大腸桿菌斜面。

4. 操作程序

涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→95%乙醇脫色20～30s→水洗

→番紅復染1-2min→水洗→干燥→鏡檢觀察。

圖1-1 革蘭氏染色過程簡略示意圖

1. 方法與步驟

（1）涂片

取一塊載玻片，滴一小滴蒸餾水于玻片中央，用接種環以無菌操作分別平板中挑取少量可疑菌落于水滴中，混勻并涂成薄膜。

（2）干燥

室溫自然干燥。

（3）固定

固定時通過火焰2～3次即可。此過程稱熱固定，其目的是使細胞質凝固，

以固定細胞形態，并使之牢固附著在載玻片上。

（4）初染

加草酸銨結晶紫一滴，約1～2min，水洗。

（5）媒染

滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約1min，水洗。

（6）脫色

將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不

出現藍色時為止，約20～30s，立即用水沖凈酒精。

（7）復染

用番紅液染1～2min，水洗。

（8）鏡檢

干燥后，置油鏡下觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。

2. 結果與報告

根據觀察結果繪出枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等的形態圖，注明放大倍數、及觀察到的顏色。

3. 注意事項

（1）載玻片要潔凈無油跡；滴蒸餾水和取菌不宜過多；涂片時生理鹽水不宜過多；涂片必須薄而且均勻。

（2）熱固定溫度不易過高，以載玻片背面不燙手為宜，否則會改變甚至破壞細胞形態。

（3）革蘭氏染色成敗的關鍵是脫色時間，如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認為革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被誤認為是革蘭氏陽性菌。

（4）鏡檢時，以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。

（5）染色后的微生物標本是死的，在染色過程中微生物紫形態與結構均會發生一些變化，不能完全代表其生活細胞的真實情況，染色觀察時需要注意。